多重PCR（Multiplex polymerase chain reaction，MPCR）是指通過一次PCR反應同時對多個靶標進行擴增，結合一定的檢測手段對擴增產物進行檢測，從而實現對多個靶目標進行診斷的科技。 MPCR具有高效率、高通量、低成本的特性而被深入研究。

現時MPCR科技已被廣泛應用於科學研究和疾病診斷等領域，文中從MPCR擴增與檢測兩方面概述了MPCR科技發展及其應用，討論了MPCR科技的優點及存在的問題，並且提出將反應體系分隔成小液滴或結合管式對流PCR（Capillary convective PCR，CCPCR）科技的管道有望提高固相載體表面的擴增效率，從而開發出擴增效率高、一致性好、體系穩定、檢測重數高的多重PCR科技。

一、多重PCR科技原理

多重PCR科技是在一個PCR反應體系中加入多個引子對，同時擴增同一DNA或不同DNA的多個靶序列。這些靶序列的長度不同，使得擴增產物在電泳分析時能够被有效區分。多重PCR科技由Chamberlain等於1988年建立，其原理與常規PCR相同，但需要優化反應體系和反應條件，使其適合各個引子對及其靶序列。

二、多重螢光定量PCR科技

多重螢光定量PCR（Multiple fluorescencequantitative PCR）科技是在螢光定量PCR科技的基礎上，利用幾種不同螢光基團的組合，結合儀器對不同通道螢光的檢測能力實現對多個靶標的實时定量檢測。

TaqMan水解探針（Hydrolysisprobes）是多重螢光PCR體系中常用也是最多一種探針，探針一端標記發光基團，另一端標記淬滅基團，通過在不同序列末端標記不同螢光基團及相應的淬滅基團，即可形成不同的TaqMan水解探針，將上述探針及相應的擴增引子加至同一反應體系，即可實現對多個靶標的共同檢測。

三、基於螢光染料的多重PCR科技

非特異性的螢光染料嵌入到DNA雙鏈小溝中後，在特定的激發光激發後將會產生一定波長的螢光。

以此為基礎發展了熔解曲線（Meltingcurve）分析法，利用不同DNA序列具有不同Tm值的特徵，在PCR反應結束後，通過程式升溫使雙鏈逐漸解鏈成單鏈，當達到雙鏈特异的Tm值所對應的溫度時，熒光强度大幅度降低，利用這樣的原理可以對PCR中不同長度的雙鏈產物或相同長度不同GC含量的雙鏈進行分析。

利用多重實时PCR熔解曲線分析的方法，進行病毒鑒別。

針對不同的型別設計了特异性的引子對，從而對範本進行擴增生成不同的擴增子，擴增子之間T m值各有差异，最後通過熔解曲線峰的位置進行鑒別。

在熔解曲線分析科技的基礎上發展而來的高解析度熔解曲線科技是一種利用飽和染料，借助高解析度的儀器，實現對單個核苷酸熔解溫度不同從而形成不同形態熔解曲線，進而對基因進行分析的新技術，它具有極高的靈敏度，能够檢測出單個堿基之間的差別，現時主要應用於單核苷酸多態性分析、甲基化分析、基因突變、基因分型等領域檢測。

四、多重PCR科技的應用

多重PCR科技在基因研究、臨床診斷、法醫學等多個領域具有重要應用價值，以下列舉了一些典型應用實例：