眾所周知，傳統梯度PCR，一次只能優化一個最佳溫度，還要一個個調試，退火、變性、延伸等最佳溫度……
不用擔心，每得科技PCR，就可以幫你解决這個棘手的難題！
一次優化兩個步驟的溫度，一步完成優化程式
那麼，現在就來了解一下，是什麼功能，能解决這個難題～
首先我們要先瞭解線性梯度溫度和二維梯度溫度的意義及應用。
1、什麼是線性梯度溫度？
PCR反應能否成功，退火溫度是關鍵。 線性梯度指在PCR擴增反應中每一行的溫度呈線性的管道顯示，直白點就是從一個固定的溫度點，遞增或遞減的形式形成一條直線。 根據結果，一步就可以摸索出最適反應條件。 因為被擴增的不同的DNA片段其最適合的退火溫度不同，通過設定一系列的線性梯度退火溫度進行擴增，從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的最適合退火溫度進行有效的擴增。
2、什麼是二維梯度溫度？
二維梯度PCR是一種改良的PCR科技，它採用兩種溫度梯度對PCR反應進行優化，能够提高PCR反應的特異性和產物純度。 它基於不同溫度下，引子與範本結合能力的變化，通過將引子濃度、溫度等因素逐漸升高或降低，使反應中優化溫度梯度，以達到PCR反應體系在最適宜的溫度條件下進行特异性擴增的過程。 這種方法可以避免由於引子結合不足或非特异性產生的雜交產物，優化反應溫度等溫度參數，使反應產物更加純淨和特異。 相比於傳統PCR，它在二維空間，即空間和時間上設定了不同的反應溫度。 有96種溫度組合，進而探索和篩選出最優PCR擴增反應溫度條件。
線性梯度的應用
主要用於研究未知DNA退火溫度的擴增。 適用於司法科學、醫學、食品工業、分子生物學、生物技術、環境科學、微生物學、臨床診斷、流行病學、遺傳學、基因晶片、基因檢測、基因克隆、基因表達等。 在不設定梯度的情况下亦可當做普通的PCR儀用。
一般情况下，傳統梯度PCR儀僅考慮了退火溫度的可變性，對變性溫度進行默認設置95℃，延伸溫度默認為72℃。 但是，對於基因擴增的擴增效率如何，同樣需要考慮變性溫度的變化。
譬如，某一DNA片段在93℃，條帶最亮； 或者某一DNA片段在93.6℃，條帶最亮； 此時就需要對變性溫度進行探索，應用二維梯度可以一步完成優化。
01 線性梯度
（1）在退火溫度步驟裡點擊高級設定，切換梯度管道為“線性”；
（2）設定溫度、梯度增量；
（3）設定溫度增量及其開啟點；
（4）設定時間增量及其開啟點；
（5）設定變溫速率。
02 二維梯度
在實際應用中，研究學者會依據基因片段大小、引子Tm值高低和自身實驗需要，預設變性溫度和退火溫度的範圍。 實驗過程中，二維梯度PCR儀會自動完成梯度溫度的設定與調整，為PCR擴增創造最適宜的溫度反應條件。
RePure-C智慧二維梯度PCR儀二維梯度步驟設定：
（1）溫控程式內添加反應步驟。
（2）設定梯度溫度：縱向梯度範圍0.1-30℃，橫向梯度範圍0.1～42℃。
（3）根據實驗需求可以設定溫度增量和時間增量及開啟點、變溫速率。
01 線性梯度
（1）快速摸索最佳退火溫度
線性梯度能同時進行多個不同退火溫度的PCR反應，進而探索得出最佳退火溫度。
（2）縮短實驗時間
僅一次實驗就能確定特定體系相應的最優退火溫度。 從而可在短時間內對PCR實驗進行優化，大大提高PCR科研效率。
（3）提高實驗效率，降低成本
縮短了實驗時間，减少了樣品的使用，進而提高實驗效率，降低成本。
02 二維梯度
（1）提高PCR反應的特異性
在二維梯度溫度下，引子與範本結合能力的變化，可以使反應具有更高的特異性並减少非特異性雜交產物的產生。
（2）提高PCR反應的產物純度
通過對反應中各分子靶點進行優化，以使放大的DNA產物得到放大。
（3）檢測基因點突變
根據已知的突變位點設計適當的引子，通過PCR擴增得到目標基因的片段，然後對擴增產物進行測序，檢測突變位點。
（4）檢測種群間的遺傳多樣性
通過二維梯度PCR擴增，產物進行測序，發現突變位點，比對種群間的遺傳物質多樣性。
（5）操作簡單
二維梯度PCR僅僅需要配置一個反應體系即可。
（6）提高陽性檢測準確性
二維梯度PCR一次性就可得到96種溫度組合，大大减免了樣品簡單的交叉污染，降低了假陽性出現的幾率，進而提高了真陽性的檢測準確性。
（7）縮短實驗時間
由於二維梯度PCR可以根據溫度的不同，優化出最佳反應溫度，縮短了多次探索變性溫度或者退火溫度的時間。
綜上所述，與線性梯度相比，二維梯度不僅可以一次性進行探索96種溫度組合，從而更快速，更準確的得出最適的變性和退火的溫度組合，確保了PCR實驗在最適溫度條件下進行擴增反應，從而提高了引子與範本的特異結合，進而提高了擴增效率。 並且可以檢測點突變和遺傳多樣性，未來在預防、診斷和治療某些疾病中提供了更多幫助。
線性梯度功能，每得科技RP全系列梯度PCR儀都具有此功能。
二維梯度功能，至今已有多種型號，如RePure-C、RePure-D、RePure-D（P）
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不用擔心，每得科技PCR，就可以幫你解决這個棘手的難題！
一次優化兩個步驟的溫度，一步完成優化程式
那麼，現在就來了解一下，是什麼功能，能解决這個難題～
首先我們要先瞭解線性梯度溫度和二維梯度溫度的意義及應用。
1、什麼是線性梯度溫度？
PCR反應能否成功，退火溫度是關鍵。 線性梯度指在PCR擴增反應中每一行的溫度呈線性的管道顯示，直白點就是從一個固定的溫度點，遞增或遞減的形式形成一條直線。 根據結果，一步就可以摸索出最適反應條件。 因為被擴增的不同的DNA片段其最適合的退火溫度不同，通過設定一系列的線性梯度退火溫度進行擴增，從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的最適合退火溫度進行有效的擴增。
2、什麼是二維梯度溫度？
二維梯度PCR是一種改良的PCR科技，它採用兩種溫度梯度對PCR反應進行優化，能够提高PCR反應的特異性和產物純度。 它基於不同溫度下，引子與範本結合能力的變化，通過將引子濃度、溫度等因素逐漸升高或降低，使反應中優化溫度梯度，以達到PCR反應體系在最適宜的溫度條件下進行特异性擴增的過程。 這種方法可以避免由於引子結合不足或非特异性產生的雜交產物，優化反應溫度等溫度參數，使反應產物更加純淨和特異。 相比於傳統PCR，它在二維空間，即空間和時間上設定了不同的反應溫度。 有96種溫度組合，進而探索和篩選出最優PCR擴增反應溫度條件。
線性梯度的應用
線性梯度的應用
主要用於研究未知DNA退火溫度的擴增。 適用於司法科學、醫學、食品工業、分子生物學、生物技術、環境科學、微生物學、臨床診斷、流行病學、遺傳學、基因晶片、基因檢測、基因克隆、基因表達等。 在不設定梯度的情况下亦可當做普通的PCR儀用。
二維梯度的應用
一般情况下，傳統梯度PCR儀僅考慮了退火溫度的可變性，對變性溫度進行默認設置95℃，延伸溫度默認為72℃。 但是，對於基因擴增的擴增效率如何，同樣需要考慮變性溫度的變化。
譬如，某一DNA片段在93℃，條帶最亮； 或者某一DNA片段在93.6℃，條帶最亮； 此時就需要對變性溫度進行探索，應用二維梯度可以一步完成優化。
01 線性梯度
（1）在退火溫度步驟裡點擊高級設定，切換梯度管道為“線性”；
（2）設定溫度、梯度增量；
（3）設定溫度增量及其開啟點；
（4）設定時間增量及其開啟點；
（5）設定變溫速率。
02 二維梯度
在實際應用中，研究學者會依據基因片段大小、引子Tm值高低和自身實驗需要，預設變性溫度和退火溫度的範圍。 實驗過程中，二維梯度PCR儀會自動完成梯度溫度的設定與調整，為PCR擴增創造最適宜的溫度反應條件。
RePure-C智慧二維梯度PCR儀二維梯度步驟設定：
（1）溫控程式內添加反應步驟。
（2）設定梯度溫度：縱向梯度範圍0.1-30℃，橫向梯度範圍0.1～42℃。
注意：變性步驟裏需設定縱向梯度，退火步驟裏需設定橫向梯度。
（3）根據實驗需求可以設定溫度增量和時間增量及開啟點、變溫速率。
01 線性梯度
（1）快速摸索最佳退火溫度
線性梯度能同時進行多個不同退火溫度的PCR反應，進而探索得出最佳退火溫度。
（2）縮短實驗時間
僅一次實驗就能確定特定體系相應的最優退火溫度。 從而可在短時間內對PCR實驗進行優化，大大提高PCR科研效率。
（3）提高實驗效率，降低成本
縮短了實驗時間，减少了樣品的使用，進而提高實驗效率，降低成本。
02 二維梯度
（1）提高PCR反應的特異性
在二維梯度溫度下，引子與範本結合能力的變化，可以使反應具有更高的特異性並减少非特異性雜交產物的產生。
（2）提高PCR反應的產物純度
通過對反應中各分子靶點進行優化，以使放大的DNA產物得到放大。
（3）檢測基因點突變
根據已知的突變位點設計適當的引子，通過PCR擴增得到目標基因的片段，然後對擴增產物進行測序，檢測突變位點。
（4）檢測種群間的遺傳多樣性
通過二維梯度PCR擴增，產物進行測序，發現突變位點，比對種群間的遺傳物質多樣性。
（5）操作簡單
二維梯度PCR僅僅需要配置一個反應體系即可。
（6）提高陽性檢測準確性
二維梯度PCR一次性就可得到96種溫度組合，大大减免了樣品簡單的交叉污染，降低了假陽性出現的幾率，進而提高了真陽性的檢測準確性。
（7）縮短實驗時間
由於二維梯度PCR可以根據溫度的不同，優化出最佳反應溫度，縮短了多次探索變性溫度或者退火溫度的時間。
綜上所述，與線性梯度相比，二維梯度不僅可以一次性進行探索96種溫度組合，從而更快速，更準確的得出最適的變性和退火的溫度組合，確保了PCR實驗在最適溫度條件下進行擴增反應，從而提高了引子與範本的特異結合，進而提高了擴增效率。 並且可以檢測點突變和遺傳多樣性，未來在預防、診斷和治療某些疾病中提供了更多幫助。
線性梯度功能，每得科技RP全系列梯度PCR儀都具有此功能。
二維梯度功能，至今已有多種型號，如RePure-C、RePure-D、RePure-D（P）